瘤果黑种草子颗粒的初步药效学研究和急性毒性实验研究.pdf 7页VIP

瘤果黑种草子颗粒的初步药效学研究与 急性毒性实验研究 肖琼1李晓瑾10。朱军2王月娥1 (1．新疆医科大学中医学院，新疆乌鲁木齐830054；2．新疆维吾尔自治区中药民族药研究所新疆乌鲁木齐 830002) 摘要：目的：瘤果黑种草子颗粒的初步药效学研究及其急性毒性实验研究。方法：选用肾阳 虚实验动物模型，初步探究黑种草子颗粒的补肾作用；使用最大耐受量方法对瘤果黑种草子 原药材及其各部位的急性毒性进行研究。结果：瘤果黑种草子制剂及各部位对肾阳虚小鼠游 泳时间、自主活动时间、脏器指数(P0．01)具有显著性差异。急性毒性试验初步研究中 黑种草子原药材组、去油黑种草子组、黑种草子油B组、C组动物，第14天实验结束，小 鼠未死亡。结论：瘤果黑种草子不同制剂对肾阳虚小鼠脏器指数、游泳时间、自主活动时间 具有改善作用。通过急性毒性实验可判断瘤果黑种草子原药材组、去油瘤果黑种草子组、瘤 果黑种草子油B组、C组的毒性很小或没有毒性 子，是我国新疆维吾尔族习用药材，性味甘、辛、温【1】。具有利尿，补脑，补肾，活血，解 毒，下乳，通经，止咳，乌发，抗衰老等作用：常用于胸闷气促，乳房肿痛，耳呜，乳汁减 少，热淋，石淋，闭经等症【2】。本实验首次对黑种草子的补肾作用和毒性进行研究。 l仪器与材料 1．1实验仪器：XT-100型高速多功能粉碎机(浙江永康市红太阳机电有限公司生产昆山市 超声仪器有限公司)；ZF．1型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)；分析天平(BS200S) 由北京赛多利斯仪器系统有限公司生产；GS．671电子秤由大连星海生物有限公司生产； YLS．1A型多功能小鼠自主活动记录仪(山东省医学科学院设备供应站)。 1．2药物：瘤果黑种草子(新疆药业集团西天山药材有限公司种植基地提供) 1．3动物：昆明品系小鼠200只，由新疆医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：医动 字l乒如03号。 2方法与结果 2．1瘤果黑种草子不同制剂对肾阳虚小鼠模型的影响 2．1．1实验方法 选健康雄性昆明种小鼠60只，动物房适应饲养3天后，随机分为5组，除第一组作为空白 对照组，其余4组腹腔注射氢化可的松注射液，剂量25mgacg·d-1；同时空白对照组与模型组给 mL／lO 予蒸馏水灌胃0．2 g，其余各组分别按表1剂量给予黑种草子制剂灌胃，连续给药10天。 末次给药lh后，称重测定小鼠自主活动次数、小鼠游泳存活时间及小鼠脏器指数【3】。 2．1．2实验动物的给药 各组小鼠分别按剂量灌胃连续给药10天；配制药液均由4C冰箱保存备用，使用时摇 匀。各组小鼠分组及用药情况见表l： 表l实验小鼠给药剂量 2．1．3观测指标及方法 2．1．3．1一般观察 试验期间每日观察记录各组小鼠的一般状态情况，以及进食情况，并记录。 2．13．2对小鼠自主活动次数的影响 末次给药lh后，称体重后，将小鼠放入自主活动仪内，前3min为适应期，后5min由计 数仪统计小鼠自主活动次数。室内需安静，室温保持18C一22C、湿度20％~40％【4】。 2．133对小鼠游泳存活时间的影响 玻璃缸内，每次1只，小鼠尾根部负荷7％体重的重物，置水游泳，观察小鼠游泳至力竭(在 水下lOs不能上浮)，该时间为小鼠的游泳时间【5】。 2．13．4对小鼠脏器指数的影响 记录完小鼠的游泳存活时间后。即刻将小鼠取出解剖，取其肾、睾丸、附睾、前列腺+精 囊，用分析天平称重并计算脏器指数【6】。 3小鼠肾阳虚实验结果 3．1对小鼠自主活动次数的影响 表2小鼠自主活动次数(x士S) 注：与空白对照组比较，·P0．Ol，··PO．05，与模型组比较AP0．01，AAp0．05 模型组与空白对照组自主活动次数(P0．01)，具有显著性差异。给药组的自主活动次 数高于空白对照组(PO．01)，有显著性差异；模型组的自主活动次数与给药组(PO．01)，有 显著性差异，瘤果黑种草子不同制剂对肾阳虚小鼠自主活动次数具有改善作用(见表2)。 3．2对小鼠游泳存活时间的影响 模型组小鼠游泳存活时间与空白对照组(PO．01)，具有显著性差异；模型组与给药组小 鼠游泳时间(Po．01)，具有显著性差异，瘤果黑种草子不同制剂可以延长肾阳虚小鼠游泳存 活时间(见表3)。 表3游泳存活时间的影响(z士S) 注：与空白对照组比较，·Po．01，··P0．05，与模型组比较tp0．01，AAp0．05 3．3对小鼠脏器指数的影响： 3．3．1肾脏器指数 模型组与空白对照组脏器指数(Po．01)，具有显著性差异；去油黑种草子组对其他组脏 器指数(氏O．01)，具有显著性差异，去油黑种草子对肾阳虚小鼠脏器指数具有增长的作用； 去油黑种草子组对肾阳虚小鼠脏器指数改善效果比其他制剂好(见表4)。 223 表4对小鼠肾脏器指数的影响(I士S) 注：与空白对照组比较曩Po．Ol，幸·PO．05，与模型组比较▲PO．Ol，▲▲PO．05 3．3．2精囊+肾上腺脏器指数 空白对照组与其他实验组脏器指数(尸0．01)，具有显著性差异；瘤果黑种草不同制剂对 小鼠脏器指数有改善作用(见表5)。 表5对小鼠前列腺+精囊脏器指数的影响(善士∞ 3．3．3附睾脏器指数 模型组与空白对照组脏器指数(p0．01)，具有显著性差异；黑种草子各制剂组对模型组 脏器指数(p，0．01)，具有显著性差异，瘤果黑种草不同制剂对肾阳虚小鼠脏器指数有改善作 用：去油瘤果黑种草子组对其他制剂组脏器指数(PO．01)，具有显著性差异，去油瘤果黑种 草子组对肾阳虚小鼠脏器指数改善效果比瘤果黑种草子其他制剂好(见表6)。 表6对小鼠附睾脏器指数的影响(x士S) 3．3．4睾丸脏器指数 模型组与空白对照组脏器指数(p—o．01)，具有显著性差异；去油瘤果黑种草子组对其他 制剂组脏器指数C氏O．oi)，具有显著性差异，去油瘤果黑种草子组对肾阳虚小鼠脏器指数改 善效果比瘤果黑种草子其他制剂好(见表7)。 表7对小鼠睾丸脏器指数的影响(工士曲 4急性毒性试验 急性毒性实验，又称单次给药急性毒性实验，是指在24h内一次或多次给予动物受试物 后，所产生的毒性反应。通常在新药的开发过程中，均需进行急性毒性试验。是毒理学研究 中最基础的工作，是我们了解外源化学物对机体产生毒性作用的依据c71。 4．1实验方法 4．1．2实验动物的分组 选健康雄性昆明种小鼠140只，雌雄各半，小鼠称重，随机分为7组：空白对照组、瘤 果黑种草子原药材组、去油瘤果黑种草子组、瘤果黑种草子油A组、瘤果黑种草子油B组、 瘤果黑种草子油C组及植物油组。(瘤果黑种草子油A组为石油醚提取、瘤果黑种草子油B 组为超临界流体法提取、瘤果黑种草子油C组为黑种草子熟油。) 4．1．3最大耐受量试验 目前针对瘤果黑种草子毒性研究一直未见报道，本实验初次探讨研究黑种草子毒性。因 很多中药及制剂毒性甚小，无法测出LDso，故采用最大耐受量测定实验来观察动物对这些 种药制剂的耐受量，从而对其安全性做出评估，为临床用药提供参考。一次以动物能耐受的 最大浓度及最大体积的药量来观察受试动物的毒性反应。除正常组外，瘤果黑种草子原药材 O．59／ha、去油黑种草子o．3759／na，黑种草子油A组、黑种草子油B组、黑种草子油C组及 植物油组O．2 ml／109灌胃，连续观察14天，记录可能的毒性症状和表现。 5急性毒性实验结果 5．1一般状态观察 给药后，瘤果黑种草子油A组黑种草子油A组死亡2只，其它各组小鼠未出现中毒或 22S 死亡情况，但给药后小鼠自由活动减少，食量下降，第2天瘤果黑种草子油A组死亡6只， 第3天瘤果黑种草子油A组死亡2只，3天后未死亡小鼠的活动、食量等皆恢复正常。第 14天实验结束，未死亡小鼠行动灵活，被毛光华，眼、鼻和口腔未发现异常分泌物。14日 内动物无死亡、纳食、饮水正常，呼吸及精神状况正常。 5．2药物对小鼠生长状况的影响 药物对小鼠生长状况的影响可以通过给药前后小鼠体重的改变体现出来，本试验以给药 14天后小鼠体重增加值作为小鼠生长状况的判断指标。由表8可以看出，小鼠给药后 体重增加，说明其具有促进小鼠体重增长的作用，但与空白组比较无差异。 6讨论 l肾阳虚小鼠模型的选择 现代研究认为，下丘脑．垂体．靶腺轴功能障碍和功能低下是肾阳虚症的病理基础。靶腺轴主 要包括肾上腺轴、甲状腺轴、性腺轴。这3个轴中的一个或几个出现功能低下都可能引起肾 表8小鼠体重差值统计表(工士肋 阳虚症。肾阳虚症动物模型中，氢化可的松模型是比较经典的模型，应用最多【8】。肾阳虚模 型种类较多，醋酸氢化可的松肾阳虚模型是使用较多、公认的模型之一嗍，2由上海第二医 学院于1960年创制，其后进行了大量的论证工作。该模型是基于肾阳虚病人体内存在糖皮 质激素水平低下的病理变化。通过过量外源性糖皮质激素抑制内源性激素分泌，当外源激素 撤销后，体内糖皮质激素水平降低，模拟肾阳虚病人体内病理变化。 6．2肾虚试验 氢化可的松模型是较为经典的肾阳虚证动物模型。氢化可的松所致的小鼠肾阳虚模型在 病理方面与肾阳虚证实质研究成果在很大程度上取得一致，小鼠症状表现也较好地符合肾阳 226 虚证的辨证诊断。造模后’，J、鼠出现一系列“耗竭”现象：神淡、精神不振、反应迟钝、被毛疏 松、失去光泽及脱毛、消瘦、肢尾冷、肛温降低、畏寒肢冷、拱背蜷曲等外形衰弱及寒象。 小鼠肾阳虚时各种器官会有萎缩现象，其中以。肾、睾丸、附睾、精液囊和前列腺的重量 下降最为明显。模型组小鼠的睾丸指数附睾指数低于试验组各组(PO．01)。表明药物可能 可以改善肾阳虚小鼠生殖器官的状况。试验组各组小鼠的负重游泳时间和自主活动能力高于 模型组。 6．3急性毒性实验 为确保临床用药的安全性，本试验通过精细、严密的动物实验研究，观察该药的急性毒性 反应。在小鼠灌胃给药后，连续观察14d，除黑种草子油A组外，小鼠无死亡病例，小鼠的 行为活动、精神状态、食欲、大便、小便、被毛、皮肤、呼吸、鼻、眼、口腔等均未见异常 反应。表明除黑种草子油A组外，其他实验组未见毒性。黑种草子油A组小鼠出现死亡， 但是黑种草子油B组未出现死亡，两组实验对比发现，导致小鼠死亡的原因