蛋白质分离期刊在线播放_蛋白质分离期刊怎么样(2024年12月免费观看)
WB实验优化指南:提高效率与安全性 ### 凝胶制备的优化 ꊊ传统的WB实验中,凝胶制备是一个繁琐的过程。其实,你可以提前将去离子水、30% Acr-Bis、Tris、10% SDS、TEMED 等试剂混合在一起,保存在4Ⰳ避光的地方,有效期可达一个月或更长时间。这样,整个制胶过程就简化为了只需添加一种试剂。另外,为了方便上样,可以在上层胶中加入染料指示剂,形成预染胶。当然,你也可以选择使用商品化的制胶试剂盒,虽然价格稍高,但操作更简便。 电泳缓冲液制备的优化 电泳缓冲液的配方也有优化的空间。传统的配方在高电压下会出现蛋白质信号丢失的问题,而且不能明显缩短电泳时间。经过优化后的配方(Tris 38.1 mM、甘氨酸266.7 mM、HEPES 21.0 mM、SDS 3.5 mM、pH 8.3),可以在室温、200 V、35 min内完成电泳,并且高效分离小分子蛋白。300 V时仍能正常电泳,但电压过高容易产热,需要冰浴降温。建议配置5X的电泳液备用,因为1㗧冲液室温保存后容易发生絮凝。 转膜液制备的优化 在WB实验中,甲醇的毒性是一个大问题。其实,你可以用无水乙醇来替代甲醇配制转膜液。这样一来,所有需要用甲醇的地方都可以用乙醇替代(包括膜的活化和转膜液的配制)。为了自己的健康,做实验时,能用低毒或无毒的试剂替代时,一定要替代,不要因小失大! 转印膜选择的优化 转印膜的选择也会影响实验结果。0.45 NC 膜比 0.45 PVDF 膜更好地拦截蛋白质标记染料。对于小分子量蛋白,0.22 PVDF膜的截留能力明显强于0.45 PVDF膜和0.45 NC膜。一直以来,0.22 PVDF膜都是首选,因为它不会让小分子蛋白转过。 凝胶切割的优化 ✂️ WB条带是论文造假的重灾区。每年都有无数论文因蛋白质条带而在PubPeer上受到质疑。渐渐地,一些期刊开始提倡使用未切割的凝胶。未切割的凝胶虽然增加了工作量,但可以确认相应分子量的目标蛋白并验证一抗的特异性。另外,条带太宽也不是什么好事,这样会增加非特异性条带的产生。 通过这些优化方法,你可以提高WB实验的效率、安全性和准确性。希望这些建议对你的实验有所帮助!
WB实验难?10招提高成功率! 经常做 Western blot 的朋友们,你们是否也有过这样的困惑?每次实验都像是开奖,结果总是让人捉摸不透。十个 WB 实验,七个失败,八个丑陋,九个出问题,还有一个完全不出结果。条带失踪、背景漆黑、杂带丛生……这些问题简直让人崩溃。 有时候,即使你凑齐了所有的“天时地利人和”,也不一定能得到一组完美的条带。江湖传言,一个生物学博士要跑满 1000 块胶才能顺利毕业。WB 实验本身就很难,再加上“造假”、“撤稿”、“学术不端”等丑闻,使得主流期刊对 WB 数据的要求越来越高,甚至要求作者提供原始数据和未切割的 WB 全膜条带。 对于那些出道已久的“老博士”来说,WB 的“玄学”操作早就积累了一本厚厚的攻略。今天,我就来分享一些精华内容,帮助大家提高 WB 实验的成功率,让你的条带显露真身。 跑胶是 WB 实验成败之母 提高跑胶质量的 Tips 蛋白分子量偏高或偏低 슥糖𝦘糖𖧚浓度与目的蛋白的浓度不对应。比如说,你用 12% 的胶跑 100KD 的蛋白,或者用 8% 的胶跑 20KD 的蛋白。 蛋白质降解 𑊨白质降解后很可能会在比原来位置低的地方出现主带,然后出现一些其他带。最主要的特点是所有的条带都比正常的低,并且条带模糊不清晰。 所有条带连成一片无间隔 最可能是上样量过多,其次是样品弥散(比如电泳长时间停止样品弥散)。 溴酚蓝拖尾 篸 样品溶解不好或上样前未变性完全。 纵向的纹理 上样样品中存在不溶性颗粒。 溴酚蓝很粗 𓊦𖦵缩效果不好,可能是浓缩胶太短或者配错。 在分离胶中跑不动 ️ Tris-Cl pH 值不对,或者忘记加 SDS。 一抗加成其他抗体或二抗种属加错 𐊥悦 marker 正常,其他位置没有条带,最可能是一抗加成其他抗体,或者二抗种属加错了,比如兔的加成鼠的。 解决办法 目的蛋白完全无信号,但同时做的内参是正常的,那么大部分情况是一抗抗体失效或用错二抗。 目的蛋白和内参均无信号,则考虑是否发光液失效。如果膜上没有 marker 则为转膜失败。 如果中间出现了细微条带,可能是蛋白上样量太少,或一抗浓度过低。 经验之谈 如图所展示的,一点信号都没有,大部分情况是因为抗体加错了。如果中间出现细微的条带,可能是蛋白上样量太少,一抗浓度过低,ECL 发光液失效。 希望这些小技巧能帮助大家在 WB 实验中少走弯路,提高实验成功率!ꀀ
【Cell:新研究发现生物凝聚物能够调节细胞电化学平衡】大多数生物化学研究历来侧重于维持生命运转的机械齿轮。折叠蛋白质、基因活动和电子信号通路是发现导致疾病的异常现象的最简单目标。然而,近期的研究已发现有一种不同类型的细胞结构可能发挥着同样重要的作用。这些结构被称为生物凝聚物(biological condensate),它们因密度不同而存在,就像漂浮在水中的油滴,在细胞内部形成区室,而不需要膜包围的物理边界。 以前的研究表明这些生物凝聚物可以分离或困住某些蛋白质和分子,阻碍或促进它们的活动。他们还发现,这些结构提供了一种替代能源,可能为生物化学的某些方面提供动力。不过,这些研究成果主要集中在生物凝聚物本身附近产生的影响上。科学家们还没有确定它们在物理结构之外可能影响生物化学的方式。 如今,在一项新的研究中,来自杜克大学和华盛顿大学的研究人员发现生物凝聚物的形成对细胞活动的影响远远超出了其附近的范围。相关研究结果于2024年9月10日在线发表在Cell期刊上,论文标题为“Biomolecular condensates regulate cellular electrochemical equilibria”。网页链接
AI与生物技术结合:蛋白质设计新进展 2024年10月28日,Liu等人在《Nature Methods》期刊上发表了题为《De novo protein design with a denoising diffusion network independent of pretrained structure prediction models》的文章,介绍了SCUBA-D模型。SCUBA-D是一种从头训练的蛋白质骨架去噪扩散模型,旨在通过实验验证模型设计的蛋白质能够实现预期目标。文章通过X射线验证了16个蛋白质和1个蛋白质复合物的结构,进一步证明了模型设计的血红素结合蛋白和Ras结合蛋白能够有效结合。 2024年4月19日,Rohith Krishna等人在《Science》期刊上发表了题为《Generalized Biomolecular Modeling and Design with RoseTTAFold AllAtom》的文章,提出了RoseTTAFold All-Atom(RFAA),并通过微调得到RFdiffusionAA。RFdiffusionAA能够针对小分子设计蛋白质,并通过实验验证其有效性。文章利用RFdiffusionAA设计出能够结合心脏病治疗药物digoxigenin、酶促辅因子血红素和光捕获分子bilin的蛋白质结合物。 2024年8月16日,Wei Qu等人在bioRxiv上公开了题为《P(al-atom)Is Unlocking New Path For Protein Design》的文章,介绍了Pallatom模型。Pallatom是一种蛋白质生成模型,能够产生全原子坐标的蛋白质结构。文章采用双轨框架将蛋白质符号化为token级别和原子级别的表征,并通过多层的解码过程将两种表征结合在一起。实验结果表明,Pallatom生成结果的可设计性、多样性和新颖性都得到提升。 这些研究再次证明了深度生成模型在蛋白质结构设计等复杂物理问题上的应用潜力。未来,随着AI与生物技术的进一步结合,我们有望看到更多创新性的蛋白质设计方法和应用。
WB实验:内参与目的蛋白同膜共存 젗B实验,即Western blot,是一种常用的免疫印迹技术,用于检测蛋白质的存在和表达。近年来,期刊对实验的要求不断提高,尤其是内参和目的蛋白需要在同一张膜上显示。 现在,通过先进的实验技术,完全可以在同一张膜上同时显示内参和目的蛋白,甚至双带也可以与内参共存。
之前,东京大学的研究人员在" Nature Communications "期刊上发表了一篇题为" Early-adult methionine restriction reduces methionine sulfoxide and extends lifespan in Drosophila "的研究论文。 研究显示,在果蝇成年早期限制蛋氨酸,可以延长寿命,无论总氨基酸水平是否降低,将蛋氨酸降低至对照组的10%,只需限制4周,雌性果蝇平均寿命延长了34.5%。相比之下,晚年蛋氨酸限制却没有延长寿命。 此外,研究还发现,成年早期4周的蛋氨酸限制带来的延寿益处,与终身蛋氨酸限制一样有效。 但是呢,蛋氨酸有很强的抗氧化作用,功效有促进脂肪分解,预防脂肪肝,动脉硬化,心血管疾病和肾脏疾病发生,并有助于清除人体内有害物质如铅、汞、锡等重金属等,作用很大。 有患脂肪肝、动脉硬化、冠心病、肾炎、风湿病、妊娠尿毒症者可多吃蛋氨酸。 贴士:富含蛋氨酸的食物有:黄豆、黑豆、青豆、鸡蛋、鸭蛋、鱼肉、猪肉、牛肉、大蒜、番茄、洋葱以及酸奶等。 那么我们到底该怎么吃呢?膳食指南推荐均衡饮食,多摄入优质蛋白哈。 #蛋氨酸# #氨基酸# #蛋白质# #科普# #抗衰# #寿命#
【“地表最强”?开启抵御超强辐射损害的理论依据——水熊虫,我国科学家成功破解】据央视新闻10月25日消息,今天凌晨,我国科学家基于水熊虫生存机制的相关研究论文在国际顶级学术期刊《Science》(《科学》)在线发表,为人类抵御超强辐射损害找到了理论依据。 军事科学院军事医学研究院李磊博士介绍,水熊虫是一种水生无脊椎动物,躯体非常细小,它大部分体长不超过1毫米,主要分布在北极、热带、深海、温泉等世界各地,可以耐受超强辐射、高温、高压、低温、干燥等多种极端环境,水熊虫甚至可以在外太空真空环境中生存,因此具有很高的科学研究价值和生物医学价值。 历经6年来的潜心研究,科研团队建立水熊虫的实验室培养体系,绘制其高质量基因组图谱,结合转录组、蛋白质组响应辐射的动态变化及关键分子功能和机制研究,揭示了耐受超强辐射的关键机制。 军事科学院军事医学研究院副研究员杨冬介绍,从组学分析得到的2801个辐射相关变化相关基因中,我们进一步通过分子进化和功能特征分析,将抗辐射机制归为三类: 一是从细菌、真菌、植物中水平转移到水熊虫中的外来基因,赋予了其特殊的抗逆能力;比如生成甜菜色素,起到抵抗活性氧的作用。 二是缓步动物特异蛋白倾向于高度无序,通过相分离机制促进DNA损伤修复等过程; 第三与其他门类共有的古老蛋白在水熊虫中具有特殊的辐射响应模式。 军事科学院军事医学研究院研究员张令强表示,我们发现这些在水熊虫中起抗辐射保护作用的分子,转入人源细胞以后,可以显著提升人源细胞的抗辐射能力,也提示它们具有重要潜在应用价值,为研制人类抵御超强辐射损害的“金钟罩”找到了理论依据。 据了解,多种涉核作业环境均受到超强辐射的严重威胁。针对水熊虫这种神奇的极端生命体抗逆机制的研究,将更新人类对生命系统基本构成原理和运行机制的认识,开启了全面认识超强辐射耐受机制的大门。 #最强生物水熊虫# #核辐射#
【Science Signaling | 郑晓峰课组揭示USP1-ATF4-CD98hc调控ENKTL淋巴瘤患者耐药的新机制】 北京大学生命科学学院郑晓峰课题组于2024年9月在Science Signaling期刊发表了题为“CD98hc promotes drug resistance in extranodal natural killer/T cell lymphoma through tumor cell–derived small extracellular vesicles”的研究论文。该项工作报道了ENKTL淋巴瘤细胞通过分泌含有CD98hc的外泌体来增强对化疗药物培门冬酶的抵抗能力,揭示ENKTL患者细胞耐药的一个新机制。 结外自然杀伤/T细胞淋巴瘤(ENKTL)是属于非霍奇金淋巴瘤的一类恶性肿瘤亚型。培门冬酶(PEG-asp)是ENKTL治疗的常用药物,可通过抑制肿瘤细胞核酸和蛋白的生物合成最终导致肿瘤细胞死亡。但ENKTL患者仍表现出较高的耐药性和治疗后的肿瘤复发率。此外,在疾病进展和预后监测方面,现有的常规有创方法不能灵敏地检测出是否有微小肿瘤灶残留,无法及时跟踪患者的疾病进展和预后情况。因此,对ENKTL耐药分子机制的研究对疾病的治疗和延长患者寿命具有重要的意义。 外泌体(sEVs)在体内细胞与微环境的物质交流和信号转导中发挥了极其重要的作用。肿瘤细胞分泌的sEVs携带有特定蛋白质,且蛋白质的含量在疾病发展的不同时期也存在动态变化,因此是用于监测和探究肿瘤发展机理的潜在生物标志物。我们从耐药ENKTL患者不同疾病进展阶段以及不同临床病理分型患者的血清样本中分离sEVs,并利用定量蛋白质谱等方法筛选并鉴定到CD98重链(CD98hc)蛋白,发现其在sEVs中的水平与ENKTL的耐药、进展和复发呈正相关。对其作用分子机制的研究发现,在面对化疗药物PEG-asp处理时,肿瘤细胞中USP1-ATF4-CD98hc调控轴上调CD98hc蛋白表达,CD98hc随sEVs进入肿瘤微环境中并被肿瘤细胞摄取,进而发挥促进肿瘤细胞增殖、侵袭的能力,并增强肿瘤细胞对PEG-asp的抵抗能力,最终导致ENKTL疾病的进展和耐药。对小鼠模型联合使用USP1抑制剂ML323和sEVs生成抑制剂GW4869能够增强PEG-asp对肿瘤的杀伤能力,此联合用药方案为临床耐药/复发患者的治疗提供新的靶点和思路。 本研究表明,sEVs中的CD98hc蛋白可作为监测淋巴瘤进展和耐药的临床标志物,为靶向肿瘤来源的sEVs和sEVs中的CD98hc蛋白治疗ENKTL提供了理论依据。 北京大学生命科学学院郑晓峰教授、北京大学第三医院血液科景红梅教授为本文共同通讯作者。北京大学生命科学学院已毕业博士生廖礼铭为本文第一作者。北京大学第三医院血液科杨萍博士、张伟龙博士,以及北京大学生命科学学院已毕业博士生于书玉对本文做出重要贡献。 本研究得到基金委重点项目基金和蛋白质与植物基因研究国家重点实验室的资助和支持,并得到北京大学生命科学学院公共仪器中心和凤凰工程蛋白质平台的技术支持。 原文链接:网页链接
人工智能与物理学的跨界合作? 随着人工智能神经网络被诺贝尔委员会纳入物理学领域,物理学界的顶尖期刊《物理学评论快报》也迎来了新的变化。这本被誉为诺奖摇篮的期刊,竟然宣布欢迎人工智能设计蛋白质的研究,这让人不禁怀疑,物理学界的格局是否即将发生变革? 或许,我们可以大胆预测,未来《物理学评论快报》可能会开辟专门的人工智能板块,为这一新兴领域提供更广阔的展示平台。 ⠨🙤𘀨不仅彰显了物理学界的开放与包容,也预示着人工智能与物理学的跨界合作将更加紧密。
咖啡中不仅有咖啡因,还包括多酚成分,多酚具有抗氧化和抗炎特性,可减少人体的氧化应激。然而,人们对多酚如何与食物中的其他分子相互作用知之甚少。 此前,丹麦哥本哈根大学的研究人员在《食品化学》和《农业与食品化学》期刊上发表了2篇新研究论文。图1。 研究发现,在咖啡中入牛奶,可以增强咖啡的抗炎作用,使免疫细胞的抗炎效果翻倍。在第一项研究中,研究人员人为地使免疫细胞发炎,分析了多酚-蛋白质结合在实验室条件下对免疫细胞的影响。 其中,一组细胞接受了与氨基酸发生反应的多酚,另一组细胞接受了相同剂量的多酚,还设置了对照组。 研究发现,当多酚与氨基酸发生反应时,它对免疫细胞炎症的抑制作用增强。与单独使用多酚相比,用多酚和氨基酸组合处理的免疫细胞在抗炎方面的效果是仅添加多酚的细胞的两倍。 在第二项研究中,研究人员分析了这些分子是否会在加牛奶的咖啡中相互结合。实际上,咖啡豆富含多酚,而牛奶则富含蛋白质。 研究发现,在加牛奶的咖啡中,多酚和蛋白质之间的反应也会发生。 研究人员表示,这些有益的多酚-蛋白质相互作用很可能发生在其他食物组合中,例如肉类和蔬菜或水果加牛奶,也会发生这种反应和潜在有益的抗炎作用。 #咖啡与健康# #抗炎饮食# #健康科普# #正式确诊为健康人# #女性健康# #咖啡日常# #咖啡推荐# #抗炎生活#
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